El Puerto de Rosario se halla ubicado a los 32° 56' 42'' latitud sur y 60° 38' 26'' longitud oeste. Las redes viales y ferroviarias que convergen hacia la ciudad, extienden la influencia del área portuaria hacia el región centro, la zona de Cuyo y el norte de la República Argentina, uniendo importantes centros urbanos e industriales como Santa Fe, Córdoba, Mendoza y Tucumán, y más allá de las fronteras a países vecinos como Chile, Bolivia, Paraguay, Brasil y Uruguay. Asimismo, la autopista Avenida de Circunvalación - Acceso Sur al Puerto, permite la comunicación carretera segura y descongestionada con el aeropuerto internacional de la ciudad y el acceso directo por autopista hacia el puerto sin cruzar la ciudad. El puerto está asentado estratégicamente sobre la margen derecha del río Paraná a la altura del Km. 420, cercano al escalón fluviomarítimo que conecta la navegación de ultramar con la de cabotaje, siendo el punto más al norte, dentro de la cuenca de Plata, que permite el servicio de buques oceánicos con un calado importante.
Se denomina Puerto Rosario al conjunto de instalaciones situadas entre los Km. 395 y 420,3 del Río Paraná, espacio sobre el que se extiende la Jurisdicción del Ente Administrador Puerto Rosario (ENAPRO) quien tiene a su cargo la administración del mismo.